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产物英文名称:Vero Cell HCP ELISA kit
产物中文名称:Vero 细胞宿主蛋白免疫检测试剂盒
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Vero Cell HCP ELISA kit产物介绍:
病毒疫苗或其它治疗用蛋白在Vero细胞中表达是商业用大量生产药物原料产物的经济简便方法。Vero Cell HCP ELISA试剂盒开发使用了不同终端产物和中试样品,4种不同疫苗产物是从疫苗生产商获得,包括全病毒疫苗和重组蛋白。Vero Cell HCP ELISA使用具有广泛反应性,强吸附性的多克隆抗体,可以鉴定出所有Vero细胞系中高度保守的HCP。产物灵敏性强(zui低检测浓度达 0.7ng/mL)和具有高度特异性,可以应用于任何在Vero细胞中表达的蛋白产物。
§检测原理:Vero Cell检测是一个双位点酶联免疫检测。样本中包含的Vero Cell HCPs蛋白与标记有抗- Vero Cell抗体的辣根过氧化物酶同时反应,反应发生在之前涂有一层吸附性抗- Vero Cell蛋白抗体的微量滴定板中进行。免疫反构成为夹层式结构:固相抗休-HCP-酶标记抗体。反应结束后清洗微量滴定板去除未结合反应物。添加TMB作 用底物反应。微量滴定板读数器上测定水解物浓度,水解物浓度与Vero Cell HCPs蛋白浓度成比例。用提供的标准液绘制标准曲线,根据读数可以计算出Vero Cell HCPs蛋白含量。
§检测过程:取出所有试 剂平衡到室温→分别移取50µl标准液,对照物和样品至待测孔→移取100µl anti- Vero Cell:HRP(#F501)至每孔→密封滴定板,摇床室温温育2小时,180rpm→清空小孔,用纸吸干残留液,350µl清洗缓冲液清洗4次→加 100µl TMB 作用物(#F005)→室温静置30分钟,不需摇床→加100&尘颈肠谤辞;濒反应终止液(#贵006)→分光光度计450/650苍尘读数
§结果分析:标准液(0, 2, 8, 25, 75, 200ng/mL)可用于制作标准曲线,标准液浓度相当于免疫反应HCP总浓度。根据测定的小孔中标准液吸光值绘制标准曲线。数据分析可以使用计算机选配曲线,例如点到点,三次样本函数,或四参数逻辑曲线。不要使用线性回归分析修改样品吸光值,这样会出现显着误差。也可以手工绘图,驰轴标注吸光值,齿轴标注浓度。然后根据样品吸光值计算出样品中贬颁笔浓度。(操作时每一浓度标准液都要滴定到两个小孔中,以便计算平均分光光度值,样品也需计算平均吸光值)。
Vero Cell HCP ELISA组成成份:
● Anti- Vero Cell:HRP(辣根过氧化物酶标记) 1x12mL F501(Product#)
● Anti- Vero Cell coated微量滴定板 12x8孔 F502
● Vero Cell HCP标准液(0, 2, 8, 25, 75, 200ng/mL) 1mL/瓶 F503
● Stop Solution终止液(0.5N硫磺酸) 1x12mL F006
● TMB (3,3’,5,5’-四甲基联苯氨) 1x12mL F005
● Wash Concentrate清洗物(20倍浓缩) 1x50mL F004
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Nalgene 2250-0130 50L 可高温高压操作的细口大瓶(带手柄) 1个/箱
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