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胰酶消化法培养原代细胞实验原文链接：丑迟迟辫://飞飞飞.蝉迟别尘肠别濒濒.蝉辞/补谤迟颈肠濒别-837.丑迟尘濒

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实验方法原理&苍产蝉辫;

将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用 EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。因此，较为严格地说是指成功传代之前 的培养，此时的细胞保持原有细胞的基本性质，如果是正常细胞，仍然保留二倍体数。但实际上，通常把*代至第十代以内的培养细胞统称为原代细胞培养。zui常 用的原代培养有组织块培养和分散细胞培养。
 
实验材料&苍产蝉辫;

胎鼠新生鼠

试剂、试剂盒 

1640培养基牛血清胰酶贬补苍办&谤蝉辩耻辞;蝉液碘酒

仪器、耗材&苍产蝉辫;

培养箱 培养瓶 青霉素瓶 小玻璃漏斗 平皿 吸管 移液管 纱布 手术器械 血球计数板 离心机 水浴箱

实验步骤 
一、实验材料准备

1.  Hank’s液配方：KH2PO4 0.06 g，Nacl 8.0 g，NaHCO3 0.35 g，KCl 0.4 g，葡萄糖1.0 g，Na2HPO4·H2O 0.06 g，加H2O至 1 000 ml。Hank’s液可以高压灭菌。4℃下保存。

二、具体操作

1.  将孕鼠或新生小鼠拉颈椎致死，置75%酒精泡2-3秒钟（时间不能过长、以免酒精从口和肛门浸入体内）再用碘酒消毒腹部，取胎鼠带入超净台内（或将新生小鼠在超净台内）解剖取肝脏，置平皿中。
 
2.  用Hank’s液洗涤三次，并剔除脂肪，结缔组织，血液等杂物。
 
3.  用手术剪将肝脏剪成小块（1 mm2），再用Hank’s液洗三次，转移至小青霉素瓶中。
 
4.  视组织块量加入5-6倍的0.25%胰酶液，37℃中消化20-40分钟，每隔5分钟振荡一次，或用吸管吹打一次，使细胞分离。
 
5.  加入3-5 ml培养液以终止胰酶消化作用（或加入胰酶抑制剂）。
 
6.  静置5-10分钟，使未分散的组织块下沉，取悬液加入到离心管中。
 
7.  1 000 rpm，离心10分钟，弃上清液。
 
8.  加入Hank’s液5 ml，冲散细胞，再离心一次，弃上清液。
 
9.  加入培养液1-2 ml（视细胞量），血球计数板计数。
 
10.  将细胞调整到5×105/ml左右，转移至25 ml细胞培养瓶中，37℃下培养。