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感受态,是指宿主细胞最容易接受外源基因并实现将其转化的一种生理状态,它是由受体菌的遗传性状所决定的,同时也受菌龄以及外界环境因子的影响, 比如Ca2+就可以大大促进转化的作用。细胞的感受态一般出现在对数生长期,新鲜幼嫩的细胞是制备感受态细胞和进行成功转化的关键。
仪器:超净工作台,摇床,高压灭菌锅,培养箱,制冰机,超低温冰箱,离心机,接种环,试管,摇瓶(2尝),平板,移液枪,枪头,离心管(500尘尝),贰笔管(1.5尘尝),蓝盖瓶,泡沫箱
试剂:CaCl2溶液:PIPES 1.51g,CaCl2•2H2O 4.41g,甘油 75ml,pH=7.0,定容至500ml。
LB培养基(固体、液体):Tryptone 1.00g,Yeast 0.50g,NaCl 1.00g,定容至100ml。(固体培养基加入1.5%的琼脂)
抗性:卡那霉素,氨卞青霉素,氯霉素,四环素。
材料:感受态菌株